一文读懂：养好 HepG2 细胞，哪有那么难！（六大技巧）

然而，HepG2 细胞并不容易培养好。丁香实验在此对 HepG2 细胞的复苏条件、消化酶及消化时间的选择、培养基中血清浓度的选择等相关内容进行梳理，助力科研小白们培养出生长状态良好的 HepG2 细胞。

一、HepG2 细胞的复苏条件

1. 复苏温度的选择

快速将所冻存的细胞在 40℃ 水浴摇床中慢摇至其溶解，溶解后马上转入 37 ℃ 水浴箱，手工慢摇恒温 2～3min 复苏。复苏后 800 转/ min 离心 5min，吸去上清加入 10ml 含 15% 胎牛血清 DMEM 培养基，混匀后加入细胞培养板，每孔 1 ml，在 5% CO₂ 温箱 37℃ 培养。

2. 复苏用培养基的选择

研究表明，使用 DMEM 培养基可以节省血清，HepG2 细胞贴壁所用时间短、增殖速度快。此外，使用 DMEM 培养基进行细胞复苏，能够避免配制不同培养基所带来的麻烦。

3. 复苏时的接种密度

当细胞的接种密度为 1×104/cm²，培养基的血清含量为 20% 时，细胞贴壁及增殖速度最快，5d 后可按 1:3 比例传代为最佳条件。

二、消化酶及消化时间的选择

在进行 HepG2 细胞的消化时，先用 pH7.2 的 PBS 洗涤三遍后，再用 0.25% 的胰蛋白酶溶液消化 0.5 分钟效果比较好。

此外，丁香实验也推荐此种消化方法：用1×PBS 将细胞洗涤 2 次 再加入适量的 0.15% 胰蛋白酶（含有 0.02% EDTA并以 7：3 的体积比混合）覆盖细胞约 20 秒后吸去胰蛋白酶（含有 0.02% EDTA 并以 7：3 的体积比混合）。

三、培养基中血清浓度的选择

由于人肝癌细胞株生长缓慢，恶性程度较高，对于血清的要求比较严格，其培养时所需要胎牛血清的浓度要比一般的肿瘤细胞高一些。在含 15% 胎牛血清的 DMEM 培养基中，HepG2 人肝癌细胞生长速度最快。

四、双抗浓度的选择

通过正交实验优选发现，培养基中双抗浓度为 0.5% 时传代效果较好，培养条件易于控制，且细胞能顺利生长。

五、培养基 pH 条件的选择

通过正交实验优选发现，pH7.2 时细胞传代效果较好，条件易于控制，且细胞能顺利生长。

六、细胞传代条件的选择

研究表明，HepG2 细胞汇合度在 95%-100% 时进行传代，效果最佳。

看完 HepG2 细胞的培养技巧，再来收藏订阅下细胞实验相关的学习专题，一次性打包带走实验知识点，少走弯路，高效避坑！

最后，再额外给大家总结一波 HepG2 细胞实验的经典问答，帮助大家快速上手实验！

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