焦点：利用纳米二抗成像

对任何组织染色都需要实验方面的考虑；有时是关于交叉反应的可能性，有时是关于试剂的渗透性，有时是为了寻找合适的报道分子。在对多个目标进行染色时，所有三个方面的考虑，对于生成图像结果以表现出清晰、有效和美观的科学发现都至关重要。无论您是想确定蛋白质表达、确定其位置，还是确定其是否与另一个分子共定位，JIR纳米二抗都可以帮助您深入研究其中的细节。 

以三羟甲基氨基甲烷为缓冲液，5%正常羊驼血清封闭小鼠大脑的矢状切片。在4°C下按照以下稀释度应用一抗并过夜：1:250稀释度的兔抗酪氨酸羟化酶（Abcam#ab112）；1:100稀释的小鼠抗NeuN（Millipore #MAB377）。在室温下以1:220稀释度对以下二抗孵育一小时：AlexaFluor® 488 VHH 片段羊驼抗兔IgG(H+L) (611-544-215)；Cy3VHH 片段羊驼抗小鼠IgG(H+L) (615-164-214)。使用DAPI（蓝色）对细胞核染色。图像来自UNC Histology Research Core Facility的幻灯片。

多克隆纳米二抗通过信号放大提供卓越的灵敏度。如图2所示，多克隆抗体通过与一抗的多个位置结合，实现比单克隆抗体更高的标记效率，从而产生更明亮的信号。

在对多个目标染色时，交叉吸附后的抗体让您能够构建多色图像，而无需担心来自交叉反应抗体的脱靶信号。纳米二抗可对常见种属蛋白进行交叉吸附（min X），可减少背景并增强特异性，让您体验目标蛋白的精细化分辨。

有关设计多项标记实验的更多信息

这些微小抗体片段的大小仅为传统抗体的十分之一，可提供出色的组织穿透性，使您能够减少孵育时间，或接近需要专门透化处理的目标。纳米抗体无Fc效应结构域，有利于快速清除并有助于活细胞成像技术的应用，例如免疫PET。

更多关于纳米二抗优势的信息

无需受到缀合物的限制；当没有直接缀合的抗体时，JIR二抗可让您使用多种染料而不影响分辨率。我们提供覆盖全光谱的DyLight、AlexaFluor® 和Cyanine™ 染料，以便您可以为您的滤光片组选择合适的缀合物。 

• Carrington, G., Tomlinson, D. and Peckham, M., 2019. Exploiting nanobodies and Affimers for superresolution imaging in light microscopy. Molecular Biology of the Cell, 30(22), pp.2737-2740.

• Chakravarty, R., Goel, S., and Cai, W., 2014. Nanobody: The “Magic Bullet” for Molecular Imaging?. Theranostics, 4(4), pp.386-398.

• De Groeve, K., Deschacht, N., De Koninck, C., Caveliers, V., Lahoutte, T., Devoogdt, N., Muyldermans, S., De Baetselier, P. and Raes, G., 2010. Nanobodies as Tools for In Vivo Imaging of Specific Immune Cell Types. Journal of Nuclear Medicine, 51(5), pp.782-789.

• Debie, P., Lafont, C., Defrise, M., Hansen, I., van Willigen, D., van Leeuwen, F., Gijsbers, R., D’Huyvetter, M., Devoogdt, N., Lahoutte, T., Mollard, P. and Hernot, S., 2020. Size and affinity kinetics of nanobodies influence targeting and penetration of solid tumours. Journal of Controlled Release, 317, pp.34-42.

• Erreni, M., Schorn, T., D’Autilia, F. and Doni, A., 2020. Nanobodies as Versatile Tool for Multiscale Imaging Modalities. Biomolecules, 10(12), p.1695.

• Hassanzadeh-Ghassabeh, G., Devoogdt, N., De Pauw, P., Vincke, C. and Muyldermans, S., 2013. Nanobodies and their potential applications. Nanomedicine, 8(6), pp.1013-1026.

• Jovčevska, I. and Muyldermans, S., 2019. The Therapeutic Potential of Nanobodies. BioDrugs, 34(1), pp.11-26.

• Krasniqi, A., D’Huyvetter, M., Devoogdt, N., Frejd, F., Sörensen, J., Orlova, A., Keyaerts, M. and Tolmachev, V., 2018. Same-Day Imaging Using Small Proteins: Clinical Experience and Translational Prospects in Oncology. Journal of Nuclear Medicine, 59(6), pp.885-891.

• Stark, H. Urlaub, and D. Görlich. 2015. Nanobodies: Site-specific labeling for super-resolution imaging, rapid epitope-mapping, and native protein complex isolation. eLife. 4:e11349. https://doi.org/10.7554/eLife.11349