JIA 4月优先上线文章（五）

2020年冬季以来，2.3.4.4b分支H5N8和H5N1亚型禽流感病毒先后通过野鸟迁徙入侵我国家禽，成为家禽养殖业新的威胁。同时，2.3.4.4h分支H5N6病毒在我国未免疫的水禽中存在，H7N9病毒在我国局部区域鸡群中发生零星感染，持续危害养禽业。监测这些病毒的抗原性、及时更新疫苗对于保障我国高致病性禽流感免疫防控效果具有重要意义。本研究通过抗原性分析发现，2020年至2021年在野鸟或家禽中分离的一些H5N6、H5N8和H5N1病毒与我国大规模应用的H5疫苗种毒株(H5-Re11株和H5-Re12株)的抗原性存在较大差异，部分2021年分离的H7N9病毒也与我国使用的H7-Re3株疫苗毒株存在抗原性差异。为保持疫苗株与监测毒株之间良好的抗原匹配性，本研究利用反向遗传学操作技术，构建出针对抗原变异毒株的3株重组疫苗种毒（H5-Re13、H5-Re14和H7-Re4），用于疫苗的更新。其中，H5-Re13疫苗株的HA和NA基因来自于2.3.4.4h分支的H5N6病毒（DK/FJ/S1424/20），H5-Re14疫苗株的HA和NA基因来自于2.3.4.4b分支的H5N8病毒（WS/SX/4-1/20），H7-Re4疫苗株的HA和NA基因来自于2021年分离的H7N9病毒（CK/YN/SD024/21）。进一步使用上述3株重组病毒制备新型H5+H7三价灭活疫苗，进行鸡、鸭和鹅的免疫效力研究。结果显示，H5+H7三价灭活疫苗接种鸡、鸭和鹅后均可诱导出良好的HI抗体反应；SPF鸡接种疫苗后3周时，用2020年和2021年分离到的5株不同H5和H7病毒攻击，包括3株2.3.4.4b分支病毒（H5N1、H5N6和H5N8病毒各1株）、1株2.3.4.4h分支的H5N6病毒和1株H7N9病毒，攻毒后所有对照组鸡均出现高滴度的排毒，并在攻毒后4天内全部死亡，而疫苗接种组鸡则完全抵御病毒的感染；接种疫苗的鸭和鹅在攻击2.3.4.4h或2.3.4.4b分支H5病毒后也获得完全免疫保护。本研究结果表明，新型H5+H7三价疫苗具有良好的免疫原性,对于近期监测到的H5N1、H5N6、H5N8和H7N9病毒的攻击可提供完全的免疫保护作用。鉴于不同H5病毒和H7N9病毒对家禽的威胁，本研究建议我国广泛使用该H5+H7三价灭活疫苗，并推荐该疫苗在其他受到H5和H7病毒威胁的国家应用。

叶片的光合作用主要发生在叶绿体中，叶绿体的发育受核基因编码蛋白调控。其中，PPR蛋白参与细胞器RNA编辑。在水稻中虽然鉴定出了约450个PPR蛋白家族成员，但只有少数被证明影响水稻叶绿体RNA编辑。利用基因编辑技术创造了新的水稻种质资源和突变体，能够用于水稻育种和基因功能研究。本研究鉴定了一个DYW类型PPR蛋白OsPPR9在水稻叶绿体RNA编辑中的功能。通过CRISPR/Cas9基因编辑技术获得了Osppr9突变体，该突变体叶片黄化和致死表型；在突变体中，叶绿体发育相关基因表达量降低，光合作用相关蛋白的积累减少。此外，OsPPR9蛋白功能的缺失降低了叶绿体中rps8-C182, rpoC2-C4106, rps14-C80和ndhB-C611 RNA编辑位点的编辑效率，影响水稻叶绿体的生长发育。OsPPR9在水稻叶片中表达量最高和编码一个定位于叶绿体的PPR蛋白。此外，通过酵母双杂验证OsPPR9与OsMORF2和OsMORF9相互作用。总之，我们的研究为探明PPR蛋白在水稻叶绿体发育中的作用提供了线索。